Tipificación molecular de Salmonella por PCR-RLBH en base a genes codificantes para antígenos flagelares

Abstract

Los aislamientos de Salmonella se han clasificado tradicionalmente por serotipificación, la identificación serológica de dos antígenos de superficie, el polisacárido “O” y la proteína flagelar. La serotipificación ha sido de gran ayuda para la investigación de brotes y entender la epidemiología de Salmonella. Sin embargo, la producción y el control de los antisueros necesarios para llevar a cabo la misma, requiere de una tarea laboriosa con un gran consumo de tiempo y recurso humano. Con el objeto de disminuir los problemas asociados a la producción de antisueros, nos propusimos desarrollar y evaluar un método de identificación molecular basado en la combinación de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, sigla en inglés) con la hibridación en línea reversa (RLBH, sigla en inglés) para la determinación de serovariedades de Salmonella. Dada la gran variedad de antígenos reconocidos, el estudio estuvo delimitado al gen fljB, que codifica para el antígeno de la segunda fase flagelar utilizándose 4 sondas de captura para los antígenos del complejo H1. Se estudiaron 81 cepas de referencia de Salmonella que poseen este tipo de antígenos. Se obtuvo una hibridación específica entre todos los productos amplificados con sus respectivas sondas, salvo para el caso de cuatro serovariedades con antígeno H:1,5; donde posteriormente se comprobó la presencia de polimorfismo en el sitio de unión. Los resultados estuvieron disponibles en 12 horas aproximadamente. El método demostró ser específico y reproducible e independiente de la fase expresada por la bacteria en el momento del ensayo. De esta forma, consideramos a la PCR-RLBH como una herramienta novedosa para la determinación de serovariedades de Salmonella.