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Title: Evaluación de Antígenos recombinantes de Mycobacterium tuberculosis frente a la tuberculina PPD
Authors: Argüelles, Claudia 
metadata.dc.contributor.advisor: Bontempi, Esteban
Keywords: Mycobacterium tuberculosis;Antígenos;Prueba de Tuberculina;Tuberculosis
Issue Date: 19-Dec-2011
Publisher: ANLIS; UNSAM
Abstract: La tuberculosis (TB) es una enfermedad pulmonar o generalizada causada por micobacterias del complejo Mycobacterium tuberculosis (M.tuberculosis), siendo el M.tuberculosis el agente más común en humanos. Es una de las enfermedades más antiguas que afecta al hombre y hoy en día continúa siendo una de las que causa más morbi-mortalidad en el mundo. Es por esto que un diagnóstico rápido, accesible y confiable es una de las prioridades en la lucha contra la TB. La “antigua” o “vieja” Tuberculina (OT, del nombre en inglés Old Tuberculin), introducida por Koch (un filtrado del caldo de cultivo de M.tuberculosis) y posteriormente el Derivado Proteico Purificado (Tuberculina mejorada por Florence Seibert), fueron utilizados por muchos años en pruebas cutáneas como herramienta diagnóstica. En la actualidad, como alternativa a esta prueba, se han aprobado pruebas ex vivo basadas en el principio de que células T de individuos sensibilizados con antígenos de M.tuberculosis producen interferón gamma (IFN-cuando se reencuentran con esos antígenosEstas pruebas serían más sensibles y específicas que la Prueba cutánea a la Tuberculina (PCT). Sin embargo su costo elevado limita su uso, especialmente en países en desarrollo como el nuestro. El Derivado Proteico Purificado (PPD, del término en inglés Purified Protein Derivative) es una mezcla compleja, pobremente definida, de compuestos secretados y somáticos que incluyen principalmente proteínas, y en menor proporción lípidos, glucolípidos y ácidos nucleicos, obtenidos por filtración de cultivos de cepas de M.tuberculosis y posterior precipitación con ácido tricloroacético o sulfato de amonio. Produce hipersensibilidad tardía cuando se lo administra por vía intradérmica al hombre y animales de laboratorio previamente sensibilizados con bacilos tuberculosos. La PCT tiene baja especificidad diagnóstica ya que el PPD contiene antígenos comunes a otras micobacterias patógenas pertenecientes al complejo M.tuberculosis, micobacterias no tuberculosas ambientales y la cepa vacunal M.bovis BCG (Bacilo Calmette-Guérin). RESUMEN x Debido a las limitaciones del PPD es necesario el desarrollo de nuevos reactivos específicos para el diagnóstico de tuberculosis. En el presente estudio se comparó la hipersensibilidad tardía producida en un modelo animal de experimentación (Cobayos cepa Short hair) por los antígenos recombinantes (rAgs) ESAT-6, CFP-10, Ag 85B y MPT64, de M.tuberculosis, frente a la producida por la tuberculina PPD 1-94 usada en la producción nacional. Los genes que codifican los antígenos fueron amplificados por PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) usando como templado ADN genómico de M.tuberculosis. Los productos de PCR fueron clonados en el vector pGEM-T, introducido en E. coli y luego subclonados en el vector de expresión pRSET A e introducidos en E.coli. Las proteínas recombinantes se purificaron por columnas de níquel-agarosa. Se sensibilizaron tres grupos de cobayos con M.tuberculosis, M.avium y BCG Pasteur 1173 P2 respectivamente. Se realizó un ensayo cutáneo con los rAgs: ESAT-6 CFP-10, MPT64 y Ag 85B y el PPD 1-94 en cada una de los grupos de animales previamente definidos. PPD presentó medida de reacciones cutáneas (induración) similares en los 3 grupos de animales (medida del halo de reacción mayor o igual a 5 mm). Los cuatro rAgs produjeron respuesta de hipersensibilidad tardía de similar intensidad en el grupo de cobayos sensibilizados con M.tuberculosis, no así en los grupos sensibilizados con M.avium y M.bovis BCG. Mientras ESAT-6, CFP- 10 y MPT64 produjeron halos inferiores a 5 mm, el Ag 85B respondió de manera similar al PPD en esos 2 grupos de animales. ESAT-6, CFP-10 y MPT64 serían específicos para M.tuberculosis. La respuesta producida por 3 concentraciones de una mezcla de ESAT-6, CFP- 10 y MPT64 se comparó con la producida por 3 concentraciones del PPD 1-94 en los mismos grupos de animales. La mezcla de antígenos recombinantes se comportó de manera similar al PPD en el grupo de cobayos sensibilizados con M.tuberculosis, observándose un aumento de respuesta con el aumento de la dosis. Esto no fue observado para la mezcla de rAgs en los grupos sensibilizados con BCG y M. avium. ESAT-6, CFP-10 y MPT64 podrían ser candidatos para la producción de una tuberculina más específica que permita la diferenciación de individuos xi infectados con M.tuberculosis de individuos infectados con otras micobacterias o vacunados con BCG. El uso de antígenos recombinantes permitiría también estandarizar la producción y el control de calidad de los reactivos usados para los test cutáneos.
Description: Fil: Argüelles, Claudia. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos. Maestría en Microbiología Molecular; Argentina
Fil: Bontempi, Esteban. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Parasitología Dr. Mario Fatala Chaben; Argentina.
URI: http://sgc.anlis.gob.ar/handle/123456789/567
Rights: info:eu-repo/semantics/openAccess
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