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Title: Diagnóstico serológico de tuberculosis. Evaluación de la determinación de anticuerpos libres y acomplejados anti-proteínas recombinantes de Mycobacterium tuberculosis
Authors: Schmeling, María Fernanda 
metadata.dc.contributor.advisor: Imaz, María Susana
Keywords: Pruebas Serológicas;Tuberculosis;Mycobacterium tuberculosis
Issue Date: 11-Dec-2008
Publisher: ANLIS; UNSAM
Abstract: El diagnóstico de tuberculosis (TB) no es sencillo de realizar. Los signos clínico-radiológicos no son específicos y la distinción de otras enfermedades como micosis o micobacteriosis puede ser dificultosa. Si bien la baciloscopia de esputo es útil y tiene alto valor predictivo, una proporción de pacientes con TB pulmonar (pTB) y la mayoría de aquellos con TB extrapulmonar (epTB) son baciloscopía negativa. El cultivo provee el diagnóstico de certeza de la enfermedad, es específico y más sensible que la baciloscopia, pero requiere al menos 3 semanas para la obtención de un resultado y tiene requerimientos de bioseguridad más exigentes. Entre las pruebas complementarias que se han investigado, las técnicas serológicas aparecieron como herramientas muy prometedoras para la detección temprana de TB, debido a su sencillez, rapidez y costo-efectividad. En un principio, estas pruebas se realizaban usando antígenos semipurificados, que contenían epitopes con reactividad cruzada, lo que conducía al desarrollo de pruebas con una especificidad relativamente pobre. El uso de antígenos purificados permitió solucionar parcialmente este problema, incrementado en forma importante la especificidad pero a costas de un descenso en la sensibilidad de las pruebas. La falta de respuesta serológica en una gran proporción de pacientes, que conduce a estos pobres niveles de sensibilidad, ha sido atribuida principalmente a dos factores: (i) la formación y circulación de complejos inmunes específicos no detectables por los enzimoinmunoensayos (EIE) regulares, realizados con sueros y (ii) la variación de reconocimiento antigénico de persona a persona. Por otro lado, parece claro que la utilización de antígenos específicos del complejo tuberculosis es un requisito primordial para la obtención de una prueba confiable. En este trabajo se evaluó la utilidad para el diagnóstico de TB de la determinación de anticuerpos libres y disociados de complejos inmunes por EIE empleando tres proteínas recombinantes previamente caracterizadas como inmunogénicas en humanos: el antígeno de 38kDa (Ag 38kDa), el antígeno de 16kDa (Ag 16) y el antígeno B del complejo proteico de Antígeno 85 (Ag 85B), las que fueron evaluadas tanto en forma individual como combinadas en un solo pocillo de la microplaca de ELISA. Se emplearon muestras de suero de: i) 161 pacientes con TB: 50 pTB baciloscopía/cultivo positivo (pTBb+), 60 pTB con dos baciloscopía consecutivas negativas (pTBb-), 51 epTB; ii) 114 muestras de pacientes con otras patologías: 14 micobacteriosis, 14 micosis pulmonares, 82 otras enfermedades, 4 lepra; iii) 100 personas clínicamente sanas (100). Empleando los antígenos recombinantes individuales la sensibilidad de la prueba varío en un rango de 25% a 42% para anticuerpos IgG libres y la especificidad lo hizo desde 93% a 96%. Al considerarse la contribución de la determinación de los anticuerpos disociados a los libres contra cada antígeno individual, la sensibilidad se incrementó hasta un 55%. El mejor aporte en la sensibilidad fue observado para los casos de pTB paucibacilar. El número de antígenos serológicamente reactivos, varió ampliamente de individuo a individuo. En un determinado suero, el nivel de anticuerpos específicos varió según el antígeno, independientemente del número total de antígenos reconocidospor este suero y esta heterogeneidad fue evidenciada no solamente para los anticuerpos libres sino también por aquellos anticuerpos acomplejados. La combinación de los resultados individuales a los antígenos 38kDa, Ag 16 y Ag 85B para anticuerpos tanto libres como disociados permitió la obtención de niveles de sensibilidad y especificidad de 76% y 83%, respectivamente. Cuando se estudió la actividad serológica de los tres antígenos colocados en el mismo pocillo de la placa de EIE, los niveles de sensibilidad obtenidos (63%) fueron menores a los esperados en base al combinación de los resultados individuales (76%), mientras que los niveles de especificidad fueron elevados aun para los grupos controles de micosis y micobacteriosis. Se evidenció que niveles altos de reactividad a un solo antígeno eran suficientes para dar un resultado positivo cuando se empleaba ese mismo antígeno en una mezcla. En cambio, algunos sueros de pacientes con TB y controles que mostraban baja reactividad para uno o más antígenos perdieron su positividad cuando se emplearon las mezclas. En conclusión, encontramos que ninguna de las proteínas recombinantes evaluadas, por sí sola, fue reactiva con la mayoría de los sueros de pacientes tuberculosos, ni siquiera después de considerar la contribución de la medición de anticuerpos disociados de complejos inmunes; el uso de mezclas de antígenos mejoró significativamente la utilidad del EIE como técnica complementaria para el diagnóstico de la enfermedad, permitiendo la identificación de casi un 70% de los pacientes con pTBb-, con una alta especificidad, especialmente en el grupo de enfermedades incluidas en el diagnóstico diferencial, como micosis o micobacteriosis. Estos hallazgos son promisorios y permiten presumir que el empleo de antígenos recombinantes específicos adicionales podría conducir a la detección de anticuerpos libres y disociados de la mayoría de los pacientes con TB activa. Además, la observación acerca de que altas reactividades séricas frente a un antígeno son suficientes para mantener su positividad cuando se emplean mezclas de antígenos, mientras que algunas reactividades bajas hacia uno o más antígenos se pierden cuando estos sueros se enfrentan a las mezclas, tiene importantes implicancias prácticas para el diseño de combinaciones de antígenos que permitan incrementar la capacidad diagnóstica de una prueba serológica; por tanto para una buena caracterización de un determinado antígeno sería muy valioso que los estudios acerca de su reactividad evaluaran no sólo la proporción de pacientes tuberculosos positivos, sino también la proporción de los sueros con alta reactividad frente al antígeno en cuestión.
Description: Fil: Schmeling, María Fernanda. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias Dr. Emilio Coni. Maestría en Microbiología Molecular; Argentina
Fil: Imaz, María Susana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias; Argentina
URI: http://sgc.anlis.gob.ar/handle/123456789/505
Rights: info:eu-repo/semantics/openAccess
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