Verificación de la identidad de la línea celular FRhL-2 (Macaca mulatta) por biología molecular

Abstract

[RESUMEN]: La planta de production del INEVH, fabrica la vacuna a virus vivo atenuado Candid#! que previene la fiebre hemorragica argentina (FHA), cuyo sustrato para la replication viral es la linea celular Fetal Rhesus Lung - 2 (FRhL-2) de Macaca mulatta.

Las lineas celulares utilizadas en investiga¬ tion, desarrollo y production requieren con¬ troles de calidadperiod!cos ya que al ser modelos vivos pueden sufrir cambios a Io largo del tiempo.

El objetivo del presente trabajofuerealizar la puesta a punto y su posterior validation del ensayo de identification de la linea celular FRhL-2 por tecnicas de biologia molecular, utilizando celulas certificadas inicialmente en su identidad mediante tecnicas de cariologfa y/o isoenzimas.

El metodo por biologia molecular seleccionado, utiliza la tecnica de PCR monoplex con oligonucleotides especie - espetificos para amplificar los segmentos del gen mitocondrial que codifica para la subunidad I de la enzima Citocromo C Oxidasa (COI) y asi obtener por electroforesis en gel de agarosa las bandas caracteristicas de referencia de 287pb segun Cooper y col.(2007).

Se realizaron 3 ensayos de amplification por PCR de los segmentos del gen mitocondrial (COI). Tanto en el ensayo1de puesta a punto como en el ensayo 2, se obtuvieron bandas de287pbcorrespondientes a FRhL-2 (Maca¬ ca mulatta), confirmado por secuenciacibn de dichos segmentos.

En el Ensayo 3, realizado para distintos lotes delaImea celular FRhL-2,seobservb labanda de 287pb caractenstica de la especie celular FRhL-2 en todos los casos y diferenciandose de las celulas de ratbn Mus musculus utiliza¬ das como control, cuya banda caractenstica es de150pb segun Cooper y col.(2007).

El presente método de identificación por biología molecular se considerd validado y apto para la verification de especie de la linea ce¬ lular FRhL-2 (Macaca mulatta).