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Title: Vigilancia de cepas de Histoplasma capsulatum circulantes en Argentina
Authors: Ibarra Camou, Belén 
Keywords: Histoplasma capsulatum;Histoplasmosis;Argentina
Issue Date: 2016
Publisher: ANLIS; UNSAM
Abstract: 
Histoplasma capsulatum es un hongo termodimórfico, agente causal de la histoplasmosis, una micosis de distribución mundial con importantes zonas endémicas en el continente Americano. Los distintos genotipos y variedades de H. capsulatum muestran diferente distribución geográfica y manifestaciones clínicas.
En los últimos años se han utilizado técnicas moleculares para genotipificar H. capsulatum como: RFLP, RAPD-PCR, amplificación de la región ITS y secuencias parciales de genes específicos. Estudios de tipificación basados en el análisis de múltiples secuencias (MLST) de los genes Arf, H-anti, Ole y Tub confirman que H. capsulatum es un complejo de al menos 8 clados o especies filogenéticas: Australia, Países Bajos, Eurasia, Nam1, Nam2, LAmA, LAmB y África. Un reciente estudio, propone 6 nuevas especies filogenéticas en el complejo, que comprenden LAmA1, LAmA2, LAmB1, LAmB2, RJ y BAC-1. Hasta el momento, los estudios indican que la mayoría de las cepas circulantes en Argentina son LAmB.
El objetivo de este trabajo es aportar al conocimiento de la epidemiología de la histoplasmosis en la República Argentina a través de la vigilancia de genotipos de H. capsulatum circulantes, utilizando métodos moleculares.
Se analizaron 46 cepas depositadas en la colección de cultivo del Departamento Micologia (DMic), provenientes de diferentes regiones geográficas de Argentina, y dos cepas de referencia: Downs y G186B. Se utilizaron para el análisis dos técnicas moleculares, RAPD-PCR con primer 1281-1283 y MLST (Arf, H-anti, Ole y Tub). Los perfiles originados por RAPD-PCR se analizaron con el programa BioNumerics. Las secuencias consenso obtenidas de la amplificación en ambas hebras de cada gen se alinearon y analizaron; luego se realizó un análisis de MLST de los cuatro genes. Se construyeron los árboles filogenéticos con el método de máxima verosimilitud, utilizando el modelo de sustitución nucleotídica de Jukes-Cantor en el programa MEGA v6.0. Se incluyeron en el análisis secuencias de referencia de las diferentes especies filogenéticas depositadas en el GenBank.
Se analizaron fenotipicamente 31/46 cepas; las 15 cepas restantes ingresaron a la colección antes de 2006 (año que comenzó esta investigación) y no tenían todos los datos de fenotipificación al momento de su ingreso. Veintinueve de 31 aislados presentaron macro y micromorfología compatible con H. capsulatum, solo dos presentaron micelio estéril. Sin embargo, todas mostraron termoconversión a levaduras a 37°C y producción de exoantígeno en medio líquido.
De las 46 cepas analizadas, 33 (71 %) mostraron un perfil de RAPD-PCR homogéneo al que denominamos Argentino (AR), las 13 (29 %) restantes mostraron diferentes perfiles a los que denominamos no Argentinos (NAR).
El árbol filogenético originado de MLST identificó 35 cepas como clado LAmB (76 %), 3 como clado NAm1 (6 %) (una de estas aislada del caso índice de un brote ocurrido en la Patagonia Argentina) y 1 (3 %) relacionada al clado recientemente propuesto LAmA2. Las 7 cepas restantes (15 %), agruparon separadas del clado LAmB, más relacionadas a los clados LAmA y RJ; estas cepas fueron aisladas de pacientes con manifestaciones en sistema nervioso central (SNC) que habitaron en una zona geográfica particular y la mayoría sin causa de inmunocompromiso. Este clado propuesto como nuevo en Sudamérica es soportado con un bootstrap de 98 %.
El RAPD-PCR pudo identificar presuntivamente 32/35 (91 %) cepas LAmB (perfil AR), las restantes 3 cepas LAmB mostraron un perfil NAR.
La principal especie filogenética que circula en Argentina es LAmB, además se detectaron en menor proporción cepas NAm1, LAmA2 y un grupo de cepas con características patogénicas especiales como tropismo por SNC y asociado a pacientes sin causa aparente de inmunocompromiso que habitan un área geográfica específica. Para este nuevo clado proponemos el nombre de TUKMA. Nuestros resultados indican que el RAPD-PCR puede complementar al MLST y puede ser utilizado para identificar cepas del clado LAmB con muy buena sensibilidad. No obstante, el MLST es la técnica de referencia utilizada actualmente para conocer las especies filogenéticas de H. capsulatum.
Description: 
Fil: Ibarra Camou, Belén. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud “Dr. Carlos G. Malbrán” (ANLIS). Instituto Nacional de Epidemiología (INE). Departamento de Vigilancia y Clínica Epidemiológica; Argentina
URI: http://sgc.anlis.gob.ar/handle/123456789/2428
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