Serotipificación molecular de Shigella flexneri mediante un sistema de PCR múltiples basado en los genes modificantes del antígeno O

Abstract

La shigelosis es una enfermedad aguda gastrointestinal que afecta mayoritariamente a los países en desarrollo, en los cuales S. flexneri es la especie predominante. La vigilancia epidemiológica de dicha afección es trascendental para reconocer brotes, determinar prevalencia de serotipos y conocer la diseminación microbiana en tiempo y espacio. La tipificación mediante el uso de antisueros específicos para los diferentes antígenos somáticos es considerada como el método "gold standard" y, desde hace varias décadas, es el único parámetro utilizado para clasificar Shigella a nivel mundial. La serotipificación tiene como desventajas la existencia de cepas rugosas y la cantidad y alto costo de los antisueros que se requieren para llevarla a cabo. Se desarrollaron métodos moleculares basados en los genes cromosómicos wzx y wzy (codifican para los antígenos O), obteniéndose resultados concordantes entre la serotipificación tradicional y la identificación molecular para los distintos serotipos de S. dysenteriae, S. boydii y S. sonnei, pero no para S. flexneri (con la excepción del serotipo 6). En S. flexneri, las diferencias en el antígeno O entre los serotipos se deben a la presencia de genes aportados por bacteriófagos. El propósito de este trabajo fue desarrollar un método de tipificación a nivel molecular que mediante la identificación de los genes responsables de la síntesis del antígeno O de S. flexneri permita obtener resultados que se correlacionen con los obtenidos mediante el uso de los antisueros. Se diseñaron PCR múltiples incluyendo iniciadores para los genes gtrB, gtrI, gtrII, gtrIV, gtrV, gtrX, gtrIC, oac, wzx, rfc y lpt-O que permitieron la identificación de los 19 serotipos descriptos actualmente para S. flexneri. El objetivo fue logrado ya que en las cepas evaluadas obtuvimos completa concordancia entre los resultados de ambas metodologías (PCR múltiples y aglutinación en lámina). El desarrollo de métodos de tipificación a nivel genético contribuye a la vigilancia epidemiológica de S. flexneri.