Sensibilidad a la azitromicina de aislamientos de Neisseria gonorrhoeae: primera fase de comparación de las pruebas de difusión por discos y dilución en agar

2020-08-12T00:34:53Z

Title: Sensibilidad a la azitromicina de aislamientos de Neisseria gonorrhoeae: primera fase de comparación de las pruebas de difusión por discos y dilución en agar Authors: Gianecini, Ricardo A; Irazu, Lucía; Rodriguez, Marcelo; Oviedo, Claudia; Cristaldo, P; Gonzalez, Melisa; Galarza, Patricia G.; Programa Nacional de Vigilancia de la Sensibilidad Antimicrobiana de Gonococo (PROVSAG) Abstract: Introducción y Objetivos: Actualmente la terapia antimicrobiana dual (ceftriaxona + azitromicina) se recomienda como terapia de primera línea para el tratamiento de la gonorrea no complicada en muchos países. Sin embargo, la emergencia de aislamientos resistentes a la azitromicina y/o ceftriaxona pone en riesgo la efectividad de esta estrategia de tratamiento. El conocimiento de la sensibilidad de aislamientos de N. gonorrhoeae a la azitromicina y ceftriaxona resulta imperativo. Recientemente, el CLSI estableció para azitromicina criterios de interpretación para CIM (Sensible: <=1 μg/ml). Sin embargo, criterios de interpretación para difusión por discos no han sido establecidos. El objetivo de este estudio fue comparar la actividad in vitro de aislamientos de N. gonorrhoeae mediante el método de difusión por discos y dilución en agar. Materiales y Métodos: Se estudiaron 2138 aislamientos de N. gonorrhoeae colectados entre 2015 y 2018 por el PROVSAG. Las técnicas de difusión por discos y dilución en agar se realizaron de acuerdo con lo establecido por los documentos M07-11th ed. y M02-13th ed. del CLSI. La cepa de referencia ATCC 49226 y el panel OMS 2008 se utilizaron como control de calidad de las determinaciones. Discos de azitromicina con una carga de 15 μg se utilizaron para la realización de la prueba de difusión por discos. El porcentaje de discrepancias se determinó de acuerdo con las recomendaciones establecidas en la guía CLSI M23-ED5. Resultados: En el periodo de estudio, las CIMs para azitromicina estuvieron comprendidas entre 0,016 y >=256 μg/ml, y la CIM50 / 90 fue 0,25 y 0,5 μg/ml, respectivamente. Un total de 49 aislamientos fueron categorizados como no-sensibles (n=48, CIM 2 – 8 μg/ml; n=1, CIM >=256 μg/ml). El análisis de comparación mostró que todos los aislamientos sensibles por dilución en agar tuvieron un diámetro de inhibición >=27 mm, mientras que los aislamientos no-sensibles tuvieron un diámetro de inhibición <=26 mm. Errores mayores (EM) o muy mayores (EVM) no fueron detectados. El estudio de regresión lineal evidencio una buena correlación con un r=-.39 (p<.001). Conclusiones: La prueba de difusión por discos mostró buena correlación en comparación a la dilución en agar. Utilizando el punto de corte tentativo para azitromicina de >=27 mm (sensible) y <=26 mm (no-sensible), no se observaron EM o EVM. El método de difusión por discos y el criterio de interpretación descripto en este estudio provee un método accesible principalmente en sitios de recursos limitados para el estudio de la sensibilidad a azitromicina en N. gonorrhoeae. Un estudio que involucre un mayor número de aislamientos no-sensibles seria de utilidad para confirmar estos resultados.

Comparación de las características moleculares de aislamientos de Neisseria gonorrhoeae con alta y baja resistencia a la azitromicina en Argentina

2020-08-11T19:10:19Z

Title: Comparación de las características moleculares de aislamientos de Neisseria gonorrhoeae con alta y baja resistencia a la azitromicina en Argentina Authors: Gianecini, Ricardo A; Campos, Josefina; Tomas, P; Oviedo, Claudia; Cristaldo, P; Noelia, C; Galarza, Patricia G.; Programa Nacional de Vigilancia de la Sensibilidad Antimicrobiana de Gonococo (PROVSAG) Abstract: Introducción y Objetivos: Actualmente, la azitromicina (AZM) en combinación con una cefalosporina de espectro extendido (CEE) se recomienda como terapia empírica de primera línea para el tratamiento de la gonorrea. Sin embargo, la emergencia de aislamientos con baja (CIM: 2-8 μg/ml) y alta (CIM: >=256 μg/ml) resistencia a AZM, sumado a la presencia de aislamientos con resistencia acompañante a CEE, pone en riesgo la efectividad de esta estrategia de tratamiento. En Argentina, un aislamiento con elevada resistencia a azitromicina fue observado en el año 2001. Sin embargo, hasta el año 2018, aislamientos con elevada resistencia a azitromicina no han sido reportados en nuestro medio. El objetivo de este estudio es comparar las características moleculares de aislamientos de N. gonorrhoeae con baja y elevada resistencia a AZM. Materiales y Métodos: Se estudiaron 21 aislamientos de N. gonorrhoeae colectados por el PROVSAG en el periodo 2005–2016 (n=19, CIM: 2-16 μg/ml), y 2001 y 2018 (n=2, CIM: >=256 μg/ml). El estudio molecular se realizó a través de la secuenciación de genoma completo de todos los aislamientos con la plataforma Miseq (Illumina) usando la química V2. Se realizó el análisis bioinformático donde se estudiaron los principales determinantes de resistencia a AZM (mtrR, ARNr 23S), y genotipificación con NG-MAST y MLST de la secuencia. Resultados: Aislamientos con baja resistencia a AZM fueron localizados en las provincias de Córdoba (42,1%; n=8), Buenos Aires (52,6%; n=10) y Santa Fe (5,3%; n=1). Sin embargo, ambos aislamientos con alta resistencia a azitromicina se localizaron en la provincia de Buenos Aires. El análisis molecular del ARNr 23S mostró la presencia de la mutación C2611T y A2059G en el 73,7% (14/19) y 100% (2/2) de los aislamientos con baja y alta resistencia a AZM, respectivamente. El gen mtrR reveló un cambio de aminoácido en la posición 45 (G—D) en el 42.8% (9/21) de los aislamientos, deleción de una adenina (A-) en la secuencia invertida del promotor en el 33,3% (7/21), G45G/A- en el 4,8% (1/21) y 9.5% (n=2) mostraron un alelo mosaico (N. meningitidis-like). El análisis de genotipificación mostró relaciones clonales entre aislamientos con baja y elevada resistencia a AZM. El NG-MAST ST696 y MLST ST1580 estuvo presente en el 28,6% (n=5, CIM 4 μg/ml; n=1, >=256 μg/ml) de los aislamientos. Además, dos aislamientos (n=1, CIM 2 μg/ml; n=1, CIM >=256 μg/ml) mostraron el MLST ST9363, y NG-MAST STs (8241 y 3935, respectivamente) con >=99% de identidad en las secuencias porB y tbpB. Conclusiones: En Argentina, un aislamiento con alta resistencia a AZM es evidenciado después de 15 años. Los aislamientos reportados con baja y alta resistencia a AZM estuvieron circunscriptos a una acotada región geográfica de nuestro país. El estudio de epidemiología molecular mostró aislamientos con una alta relación clonal. Actualmente, en nuestro país se recomienda la utilización de AZM para el tratamiento de C. trachomatis y M. genitalium, aun ante la sospecha y sin confirmación en todos los casos. Los hallazgos obtenidos en este estudio sostienen la necesidad de fortalecer la vigilancia para la detección temprana de aislamientos resistentes y en consecuencia la elaboración de estrategias de salud pública para el control de la diseminación de estos aislamientos.

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Comparación de las características moleculares de aislamientos de Neisseria gonorrhoeae con alta y baja resistencia a la azitromicina en Argentina